关于蛋白纯化的一些优质方法

　　抗体纯化策略

　　01、根据抗体特性。每个抗体等电点、电荷密度、疏水性、糖基化程度等生化性质各不相同。选择抗体的纯化方法，既要了解他们的共性，又要了解个性，从而制定相应的纯化策略。

　　02、根据抗体及其生产宿主特性。针对不同抗体和其生产宿主的特性差异，比较优劣性，选择最优的纯化策略。

　　03、抗体产品下游工艺开发。一般采用三步纯化策略：粗纯来捕获、浓缩和稳定样品，中间纯化去掉大部分的杂质，精细纯化取得最终的纯度和药品申报的要求。

　　抗体粗样品的预处理可考虑采用中空纤维微滤膜收集上清液，超滤膜浓缩样品再把浓缩样品转入所需缓冲液。初纯首选是蛋白 A 亲和层析捕获抗体，产品纯度可达 85-95%，同时浓缩样品、尽快去除可能会降解抗体的蛋白酶; 中间纯化采用离子交换或疏水层析去掉残留宿主杂质; 最终精细纯化一般采用凝胶过滤去除多聚体、残余杂质和获得最终的纯度要求。

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　　附亲和层析脱落配体的去除

　　用蛋白A纯化抗体是比较常用的一种方法，但由于微量脱落的A蛋白常与目标抗体形成A蛋白-IgG复合物，令去除变的复杂。

　　(1)阳离子交换层析是去除 A蛋白残基的有效方法，需要在抗体与A蛋白解聚的pH条件下进行。A蛋白不结合阳离子交换介质或者在梯度早期洗脱。以20 mM Tris-HCl，pH = 8.5 平衡柱，上样后以线性梯度洗脱，最后洗脱液的浓度达到0.25M NaCl (20mM Tris-HCl，pH = 8.5)，收集抗体峰的片断，筛选A蛋白。

　　(2)凝胶过滤层析如Superdex 200 或Sephacryl 300 在合适的 pH条件下，也可除去A蛋白-IgG 复合物，该聚合物会率先从柱上洗脱下来，接下来是分子量约15万的目标IgG，最后是分子量约 34 kd 的残留的游离重组 A 蛋白。