什么是原核蛋白表达？它的影响因素有哪些？

　　原核蛋白表达是目前常用的重组蛋白表达方式之一，操作相对简便，要求较低，相对哺乳动物表达系统更加经济节约。但是也常常遇到一些问题，比如原核表达蛋白表达量低，蛋白不表达，蛋白表达不在上清，易形成包涵体等情况。下面主要介绍影响原核蛋白表达的因素及解决办法。

　　影响原核表达的因素
　　1、翻译起始位点

　　现在大部分的表达载体都提供起始位点，所以它已经把起始密码子与核糖体结合位点的距离进行了优化，一般情况下不需要自己再添加，不过还是要留意载体图谱上是否注明有起始密码子和终止密码子。

　　2、GC含量

　　表达序列中的GC含量超过70%的时候可能会降低蛋白在大肠杆菌中的表达水平。

　　3、mRNA二级结构

　　在起始密码子附近的mRNA二级结构可能会抑制翻译的起始或者造成翻译暂停从而产生不完全的蛋白。

　　4、密码子的偏爱性

　　如果外源基因密码子的使用频率和宿主菌高效表达的基因密码子的使用频率差异较大，翻译时核糖体在稀有密码子处就会产生停顿，这不仅降低蛋白质的合成效率，导致新生肽链的错误折叠而影响延伸，甚至会停止翻译。

　　5、质粒载体的选择

　　构建质粒载体时，要考虑质粒上的元件包括启动子，多克隆位点，终止密码子，融合标签，复制子，筛选标记基因等因素。

　　6、基因或者蛋白的大小

　　一般来说小于10 kd和大于100 kd的蛋白都是难以表达的。

　　7、外源基因对宿主有毒性

　　外源基因在宿主内会抑制宿主菌的生长甚至导致宿主死亡，表观现象：宿主菌在诱导后菌体量上升缓慢或不再生长。

　　8、基因突变

　　碱基的突变、插入或缺失对阅读框的影响，可能会导致表达的蛋白质结构改变，或蛋白质合成过早终止。

　　9、培养诱导条件

　　培养基成分(C/N)及培养条件(温度、诱导时机、诱导剂，浓度、诱导时间)也是影响蛋白表达的。