什么是支原体和支原体感染？如何检测？

　　什么是支原体？支原体(Mycoplasma)又称霉形体，广泛分布于自然界(有80余种)，为目前发现的最小最简单的细胞，也是唯一一种没有细胞壁的原核细胞。支原体基因组为一环状双链DNA，分子量小，基因数量为480个，直径50-300 nm，能通过细菌滤器，大小介于细菌和病毒之间。菌落小(直径0.1-1.0 mm)，在固体培养基表面呈特有的“油煎蛋”状。不能维持固定的形态而呈现多形性，对渗透压敏感，对抑制细胞壁合成的抗生素不敏感。革兰氏染色不易着色，故常用Giemsa染色法将其染成淡紫色。

　　什么是支原体污染呢？支原体是细胞培养中最常见的，干扰实验结果的一种污染。但由于不易被察觉，有些污染的细胞仍在继续使用。据查，目前各实验室使用的二倍体细胞和传代细胞中约有11%受到支原体污染。因此，对支原体污染应严加防范。支原体污染的来源包括工作环境的污染、操作者本身的污染(一些支原体在人体是正常菌群)、培养基的污染、污染支原体的细胞造成的交叉污染、实验器材带来的污染和用来制备细胞的原始组织或器官的污染。组织细胞培养工作中，主要从以下几个方面来预防支原体的污染：控制环境污染;严格实验操作;细胞培养基和器材要保证无菌;在细胞培养基中加入适量的抗生素。

　　支原体污染检测方法

　　01、分离培养法

　　分离培养法是从可疑的细胞培养体系中取样，并接种到最适宜支原体生长的琼脂平板上。如果样本中含有支原体，它们就会在这种琼脂平板上疯狂生长，最终形成明显可见的特征性菌落。分离培养法基本不会出现假阴性结果，因此被誉为支原体检测金标准。不过分离培养法也存在两个弊端：

　　1、检测时间太长，支原体要长出明显克隆至少需要4周时间。

　　2、尽管它可以检测绝大多数支原体种类，但也有力所不及的时候，比如分离培养法就不能检出支原体M. hyorhinis菌株的存在。

　　如果实在不想等这么久，或者希望在分离培养法的等待过程中先拿到初步结果，可以试一试酶学检测法、ELISA法、DNA染色法或PCR法。不过需要注意的是，上述检测方法都不能单独检出所有类型的支原体，而且灵敏度也没有分离培养法高，所以最好结合使用两种方法以获得最可靠的检测结果。

　　02、酶学检测法

　　酶学检测是将可疑样本添加到特定底物中，在这一体系内支原体的酶可以将ADP转化为ATP，随后能利用ATP发光的luciferase酶就可以指示支原体的存在。

　　03、ELISA检测法

　　ELISA也能用于支原体检测，以ELISA法为基础的支原体检测一般使用针对支原体16S rRNA基因的带标记探针或抗体，来检测培养物中是否含有支原体。

　　04、DNA荧光染色法

　　需要将可疑样品与指示细胞共同培养，因此一般需要几天时间。DNA检测所用的指示细胞通常是细胞质区域较大的Vero细胞，如果原样本中含有支原体，那么当细胞DNA被荧光染料(如Hoechst染料)染色时，就可以在指示细胞的核周围观察到荧光斑点或荧光颗粒。DNA法则可以准确的将分离培养法不能检测的支原体M. hyorhinis菌株检测出来。国际支原体组织(IOM)推荐分离培养法和DNA荧光染色法作为常规检测方法。

　　但最近PCR法的发展令人鼓舞

　　05、PCR检测法

　　PCR法检测支原体只需几个小时，是最快也是最灵敏的支原体检测方法。该方法采用针对支原体DNA的引物用PCR检测可疑样本，其中PCR引物通常针对支原体的16S rRNA基因。在凝胶电泳过程中，支原体DNA会显示为特异性条带，以此指示支原体的存在。PCR法可以检测大多数支原体，但谨慎起见最好同时使用另一种检测方法来进行验证。