什么是噬菌体展示技术？它的关键点在哪里？

　　噬菌体展示技术是一种的高效基因表达筛选技术，它是将外源蛋白或多肽与特定的噬菌体衣壳蛋白融合，展示在噬菌体的表面，但是却能保持相对独立的空间构象和生物活性，有利于靶分子的特异性识别及结合，从而实现基因型和表达型的统一。1985年，首次报道出Smith利用基因工程技术发明的噬菌体展示技术，发展至今，此项技术可以说已经发展得非常成熟，可以广泛地使用在抗原表位分析、单抗制备、抗体人源化、药物筛选、疫苗研制以及免疫学疾病诊断、治疗等科学研究领域。

　　噬菌体展示技术的两大核心：建库&筛选

　　什么是噬菌体建库？

　　所谓的噬菌体建库，其实没有想象中的那么复杂，其实就是从B淋巴细胞中扩增抗体的H链和L链基因文库，通过将抗体片段群与噬菌体衣壳蛋白融合表达并展示于噬菌体表面，进而形成噬菌体展示抗体库。一般来说，主要分为三种：scFv库、Fab库和VHH库。

　　噬菌体展示肽库的构建途径有哪些？

　　噬菌体展示肽库的构建目前使用的方法主要有两种：有机合成法和基因合成法。有机合成法指的是用固相肽合成技术，合成含有各种可能序列的短肽。基因工程方法则是将编码各种序列特定长度短肽的目的基因克隆进表达载体，与噬菌体的外壳蛋白基因融合表达，使得一个噬菌体上含有一种序列的肽。

　　噬菌体库主要分为哪些种类呢？
　　1、随机肽库：

　　指的是将化学合成的随机寡核苷酸序列与噬菌体的表面蛋白基因进行融合，从而在噬菌体的表面上表达出各种氨基酸组合的随机序列短肽。

　　按照大小不同，我们可以将噬菌体展示随机肽库分为六肽库、九肽库和十二肽库；按结构不同，我们可以将其分为：线性和非线性肽库；按特殊目的的需求，我们可以将其分为：偏性肽库和突变肽库（当然了，随着需求的不断提升，这种分类会变得越来越多，在这里我们就不一一描述了）。

　　2、免疫库：

　　免疫库需要通过人为干预，由经过免疫(包括疫苗注射、微生物感染、自身免疫疾病、肿瘤等)后的供体B淋巴细胞的抗体基因构建。这种方法对于特定免疫抗原的抗体淘选来说效率较高，而且也仅适用于一般一种特异性抗体的选择，且库容量要求不高，一般106-108的库容量就可满足需要。

　　3、天然库：

　　这种方法无需免疫动物，其抗体均来源于人类，可以说是完全的人源化抗体，不过亲和力一般较低。

　　免疫库的优势体现在哪些方面？

　　相对于天然库来说，我们可以从免疫库中筛选得到具备高亲和力、高特异性的抗体。但因为其经过免疫选择压力，库中针对相应免疫原的特异性的丰度会大大高于其他非特异性抗体，其中部分特异性抗体经过了免疫系统的亲和力成熟过程，从库容量较小(105 )的文库中就能筛选到针对免疫原的功能性抗体及其基因。