噬菌体展示技术：蛋白表达上的又一重大突破

　　在重组蛋白表达日新月异的今天，各种技术可谓是层出不穷，比如我们常用的五大蛋白表达系统，几乎能够满足我们所有蛋白表达的需求。而随着技术的不断精进，更多的表达技术以其高表达量、低成本、周期断、特异性强等优点得到大量的使用。其中，噬菌体展示技术就是其中一项不错的技术。

　　什么是噬菌体展示?

　　用一句话概括来说，就是一种将外源蛋白/多肽基因插入噬菌体外壳基因中，使得其随着噬菌体表达而表达的技术;

　　为什么称之为分子定向进化神器?

　　因为噬菌体展示技术实现了基因型与表型的物理连接;

　　构建过程如下：

　　构建多样性库-靶标(如肿瘤抗原)筛选-洗脱高亲和力噬菌体-感染宿主扩增-测序解码活性分子

　　这项技术的优势体现在哪些方面?

　　相比传统杂交瘤技术来说，这项技术每次筛选的效率得到了极大的提升(筛选率提升了10^6倍);

　　噬菌体展示技术的核心操作流程包含哪几步?

　　文库构建-噬菌体展示-生物淘选-阳性克隆测序-获得活性分子

　　这项技术的关键节点：

　　1、文库多样性;

　　2、淘选策略;

　　3、结合力优化;

　　相比传统杂交瘤技术，噬菌体展示技术强在哪里?

　　噬菌体展示杂交瘤技术

　　研发周期3-6个月12-24个月

　　靶点范围可靶向毒性/非免疫原分子仅限免疫原性靶点

　　人源化难度直接获得全人源抗体需要进行人源化操作

　　可以用于病毒检测吗?

　　根据最新的研究成果，噬菌体可以改造成活体探针，可以说是革命性的突破;

　　构建一个高质量噬菌体文库的步骤有哪些?

　　1、RNA提取。从免疫后的B细胞中提取基因;

　　2、PCR扩增。引物设计覆盖VH/VL基因全长

　　3、载体组装。构建噬菌体载体;

　　4、电转化。使其进去到大肠杆菌中;

　　如何保证筛选到高亲和力分子?

　　通过三轮淘选以及交叉洗脱策略，获得高亲和力分子;

　　1、去除杂质。通过一层筛查，去除正常细胞和血清;

　　2、严苛洗脱。0.1M甘氨酸(pH 2.2)/竞争性底物

　　3、解离常数测试。通过SPR验证，使得其kd值达到PM级别;

　　未来发展有哪些颠覆性方向?

　　1、AI辅助设计。AlphaFold2预测结合界面指导库优化(缩短筛库时间70%)

　　2、体内定向进化。注射噬菌体库到动物模型直接筛选器官靶向分子

　　3、联合mRNA展示。突破核糖体终止密码子限制

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