CHO稳定细胞株构建-早期抗体药物研发成功的核心

　　药品研发一直都是一个及其繁琐且精确度高的过程，而能否成功构建合适用于生产的高表达细胞株，则是药物成功的第一步，也是其中最为关键的步骤之一。CHO细胞的GS筛选系统，是目前使用最为广泛的筛选系统。

　　CHO细胞GS筛选系统的优点主要表现在哪些方面呢?

　　a、遗传背景清楚，因为其分泌的内源蛋白非常的少，所以，非常容易实现外源蛋白的分离和纯化。

　　b、GS筛选系统的产量高，周期快。

　　GS筛选系统的原理是什么?

　　我们知道，哺乳细胞的生长是离不开谷氨酰胺的，而谷氨酰胺合成酶其实就是一种能将谷氨酸和氨合成为谷氨酰胺的酶，这种酶促反应是动物细胞获得谷氨酰胺的主要途径。

　　但是，CHO细胞内源的谷氨酰胺在合成酶活性方面相对来说较低，所表达的谷氨酰胺没办法维持细胞的快速生长，所以，我们在日常操作时，必须将其放在培养基，同时在其中添加外源的谷氨酰胺，这样才能有效地保证细胞的生长。

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　　那我们要遵循什么筛选策略呢?

　　1、宿主细胞的选择

　　一般来说，工业上使用的CHO细胞主要有两大类：

　　①GS野生型，含弱的GS活性(GSWT)：CHO-K1(ATCCCCL-61，ECACC85051005)，CHOK1SV(lonza);

　　②GS缺陷型，敲除GS活性(GSKO)：CHOK1SV-KO(Lonza),CHOZN(Merk),HD-BIOP3(Horizon)。

　　不过在使用之前我们需要注意的是：这些商业化的细胞株都需要支付高额的专利费用，否则，对后期的研究会出现极大的影响。

　　2、细胞株筛选方案

　　①重组载体构建。选择适合的信号肽，对抗体重轻链基因进行密码子优化。将目的基因构建到普健专有的GS载体上。

　　②转染及Minipools筛选。使用具备普健生物专利的CHO细胞进行转染。在转染48h后，通过加压来筛选Minipools。利用Elisa或Octet进行初筛，选取最优的30个minipools，逐级扩大培养至TPP摇管中，利用简单的流加表达工艺筛选出3株最优的minipools。

　　③细胞株单克隆化。采用特定的有限稀释方法铺板，Imager跟踪成像。利用Elisa或Octet进行初筛，选取最优的30个monoclones，逐级扩大培养至TPP摇管中，利用简单的流加表达工艺筛选出10株最优的monoclones。将10株最优的monoclones传至摇瓶中，利用特定的摇瓶工艺对10株monoclones进行细胞生长特性，代谢特性，产量，抗体糖基化修饰，抗体聚体等质量分析，综合筛选出最优的3株生产用细胞株。

　　④个性化产量优化和糖型调节。普健生物有多种基础培养基，补料培养基及流加表达培养方案。可以根据不同的细胞株生长特性，筛选出最优的流加表达工艺。同时，也可以用特定的调糖培养基调节不同的糖型的比例。

　　⑤完善的抗体质量评估系统。主要包括抗体效价，活性分析;抗体聚体分析;抗体糖基化分析;抗体效能分析等。

　　⑥生产细胞株稳定性分析。包括基因型稳定性分析及30个代次的传代稳定性分析。

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