普健生物 http://kx.atagenix.cn/ 2022-05-07
昆虫杆状病毒表达系统(IBEVS),是现阶段使用最为广泛的基因表达系统之一,因为它的基因序列中不包含任何会对哺乳动物产生影响的病毒片段, 所以,自打昆虫杆状病毒表达系统问世以来,就得到了广泛的使用。
在之前的文章中,普健生物和大家介绍过其他几大表达系统:大肠杆菌、酵母和哺乳动物细胞表达系统,而相比这三大表达系统而言,昆虫杆状病毒表达系统有哪些作用呢?
1、它可以作为载体超高效的表达真核基因,大批量生产我们需要的蛋白
2、它可以用来制作杀虫剂,有效提升害虫的防治效率
3、用来研究杆状病毒基因组
4、用来研究真核基因表达的调控机制
那么,杆状病毒昆虫表达系统具备哪些优势呢?
1.因为重组病毒的分离是通过蓝白斑筛选,不存在野生型和非重组型病毒污染的问题,因此不需要传统繁琐的空斑分析来纯化重组病毒。
2.很大程度上缩短了重组病毒构建所需要的时间且重组效率达到100%。
3.外源基因在昆虫细胞内能进行正确折叠,表达出的目的蛋白结构上更接近天然蛋白,且具有完整的生物学功能。
4.昆虫细胞能对翻译后蛋白进行磷酸化、糖基化、酰基化、信号肽切除及肽段的切割和分解等加工修饰。
5.杆状病毒能容纳大分子的插入片段,能包装大的基因片段。
6.杆状病毒表达系统具备在同一细胞内同时表达多个基因的能力,既可采用不同的重组病毒同时感染细胞,也可在同一转移载体上同时克隆两个外源基因,表达产物可加工形成具有活性的异源二聚体或多聚体。
7.昆虫细胞悬浮生长,容易放大培养,有利于大规模表达重组蛋白。
8.杆状病毒对脊椎动物无感染性,现有研究也表明其启动子在动物细胞中没有活性,因此在表达癌基因或有潜在毒性的蛋白时明显优于其他系统。
昆虫杆状病毒的大规模培养
实现昆虫杆状病毒大规模生产的方法有很多,不过就大类型来看的话,主要分为两种:贴壁细胞培养和悬浮细胞培养。因为昆虫细胞体积相对来说较大,而且形状不规整,容易抱团,在收到病毒感染后,会膨胀1.5倍左右,这样会造成昆虫细胞的大规模培养更加的困难。普健生物有鉴于此,采用摇瓶、转瓶气升发酵罐和灌注培养等方法,通过气升式和涡旋搅动式,让细胞在生物反应器中实现悬浮,使得生产规模达到3-90L,细胞倍增时间18-24 h,细胞密度可达5×106个/mL,相对于传统的贴壁培养来说,结果非常的接近,能够满足不同的实验的各种不同需求。那么,如何用昆虫杆状病毒表达蛋白呢?我们在“杆状病毒昆虫表达系统-不再害怕重组蛋白”一文中有详细介绍,感兴趣的同学可以去了解一下。如果您想了解更多关于昆虫表达系统方面的内容,敬请关注武汉普健生物。
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