什么是哺乳动物细胞表面展示技术？它有什么作用？

　　利用哺乳动物细胞表达，我们可以有效地解决原核表达系统中会出现的各种问题。这种技术不仅能够展示全长抗体，还能够利用真核表达系统指导蛋白质的正确折叠，提供复杂的N型糖基化和准确的O型糖基化等多种翻译后加工功能，所以展示的抗体无论是在分子结构、理化特性方面，还是在生物学功能方面，都非常地接近天然的蛋白分子。因此，哺乳细胞表达具备其他蛋白表达所没有的优势。

　　就拿我们最常见的噬菌体展示技术与之相比，如图所示：

　　和噬菌体展示技术一样，哺乳动物细胞表面展示技术也主要包括两个部分：一、构建哺乳细胞表面展示的抗体库;二、与靶标特异性结合抗体的富集及筛选。

　　01 构建哺乳细胞表面展示抗体库

　　构建哺乳细胞表面展示库一般会用两种方法将重组DNA序列转入哺乳动物细胞中，一种是采用质粒转染，另一种则是采用病毒感染宿主菌。

　　A：通过质粒介导的文库构建

　　为了实现在细胞表面的展示抗体，我们一般通过技术，让质粒将外源抗体DNA融入到了血小板生长因子受体的跨膜区域。由于这个载体上还包含胞病毒启动子、小鼠Ig的信号肽、抗性筛选基因和c-myc标签。所以，我们可以利用scFv羧基末端的c-myc标签来测量抗体的表达水平。

　　B：通过病毒介导的文库构建

　　以慢病毒为例：

　　慢病毒导入外源DNA需要三种质粒：表达载体，包装载体和pVSV-G质粒。pVSV-G一般用来表达VSV-G蛋白，VSV-G则用来与细胞膜磷脂成分相互作用，促进病毒和细胞膜的融合。VSV-G可以直接用来替代病毒包膜蛋白。

　　02 与靶标特异性结合抗体的富集及筛选

　　和噬菌体展示不同，哺乳细胞表面展示采用细胞分选和细胞扩增来实现目的抗体的富集，再通过FACs技术来实现特异性抗体的筛选。

　　A：细胞分选

　　一般我们采用免疫磁珠法来实现细胞的分离。它是基于细胞表面抗原与特异性单抗相结合的方式，通过抗体与磁珠相连的细胞，将被吸附的单抗滞留到磁场中，而表面无这个抗原的细胞则不能在磁场中停留，进而实现细胞分离。而免疫磁珠法分正选法和负选法(也称阳性分选法和阴性分选法)，我们需要结合需求进行选择。

　　正选法-磁珠结合的细胞就是所要分离获得的细胞;

　　负选法-磁珠结合的细胞为不需要细胞。

　　据统计，负选法的使用更多一些，因为此方法所获得的细胞表面不含有抗体和磁珠的干扰，操作起来，更加的简单一些。

　　B：目的抗体的富集及筛选

　　带有目的抗体的哺乳细胞经过多轮筛选、扩增后，则能够获得大量的富集。通过介导的质粒或者病毒颗粒，我们可以将富集的目的抗体DNA转入表达抗体的哺乳细胞当中，通过稀释获得单细胞，培养后，表达单克隆抗体，再通过流式细胞检测，筛选就能得到与靶标蛋白特异性结合的目的抗体。

　　当然那了，哺乳细胞展示技术虽然具备很多不可替代的优势和开发潜力，但是也有很多不足。比如，大部分哺乳细胞展示抗体库的库容只有106-108，远低于噬菌体展示抗体库，而且因为其操作难度较大，周期较长，所以导致其成本也相对较高。而且在进行质粒转染或者病毒侵染的过程中，也较难保证只有一种外源DNA进入单个细胞，因此，其可能会对后期抗体的筛选产生一定的干扰，造成抗体纯度不够的情况。

　　但是不管如何，哺乳细胞表面展示技术仍然是单克隆抗体筛选的一个重要手段。如果您想了解更多哺乳动物蛋白表达的内容，请查看“什么是哺乳动物细胞表达系统?它有哪些优势和不足?”