什么是质粒？盘点质粒提取的方法

　　质粒作为载体广泛应用于目的基因的克隆、测序、表达等工作。质粒抽提方法即去除 RNA，将质粒与细菌基因组 DNA分开，去除蛋白质及其它杂质，以得到相对纯净的质粒。

　　理论基础：

　　细菌质粒是一类双链闭环的小分子DNA，独立存在于染色体之外，能够进行自我复制。

　　提取质粒DNA的方法：

　　(一)碱裂解法

　　碱裂解法即用碱与SDS从E. coli(大肠杆菌)中分离制备质粒DNA。将细菌悬浮液暴露于高pH值的强阴离子洗涤剂中，使细胞壁破裂，染色体DNA和蛋白质变性，将质粒DNA释放到上清中。在处理时间和强度合适的情况下，当PH值恢复中性时，质粒DNA双链就会再次形成。

　　(二)煮沸法

　　将细菌悬浮于含有Triton X-100和溶菌酶的缓冲液中，然后加热到100℃破坏细菌外壁、使蛋白质和染色体DNA变性、并解开DNA链的碱基配对。但是。闭环质粒DNA链因为它们的磷酸二酯骨架具有互相缠绕的拓扑结构，所以彼此不会分离。当温度下降后，闭环DNA的碱基又各就各位，形成超螺旋分子。接着离心除去变性的染色体DNA和蛋白质，就可从上清中回收质粒DNA。

　　(三)质粒提取试剂盒

　　用于大肠杆菌中质粒DNA的小量提取，它结合了优化的碱裂解法，以及方便快捷的硅膜离心技术，具有高效，快捷的特点，能在30min内完成全部操作。

　　其中：碱裂解法是从事生物分子学研究的实验室每天都要用到的常规技术，我们一起来看下吧

　　碱裂解法质粒抽提

　　溶液1:

　　50mM葡萄糖/25mMTris-HCl/10mMEDTA,pH 8.0

　　溶液2:

　　0.2N NaOH/1%SDS

　　溶液3:3M醋酸钾/2M醋酸/75%酒精。

　　1、接1%含质粒的大肠杆菌细胞于2mlLB培养基。

　　2、37℃振荡培养过夜。

　　3、取1.5ml菌体于Ep管(离心管),以4000r/min离心3min,弃上清液。

　　4:加入0.1ml洛液1(1%葡萄糖,50mM/LEDTA pH8.0,25mM/LTris-HCl pH8.0)充分混台。

　　5、加入0.2ml溶液2(0.2mM/LNaOH,1%SDS,轻轻翻转混匀，置于冰浴5min.

　　6、加入0.15ml预冷溶液3(5000 mM/LKAc, pH4.8)，轻轻翻转混匀，置于冰浴5min。

　　7、以10000r/min离心20min ,取上清液于另一新Ep管。

　　8、加入等体积的异丙醇,混匀后静置10min.

　　9、以10000r/min离心20min,弃上清。

　　10、用70%乙醇0.5ml洗涤一次,抽干所有液体。

　　11、待沉淀干娱后,溶于50ulTE缓冲液中(或60℃温育去离子水)。