蛋白制备过程中如何更好地去除内毒素?

　　蛋白表达过程中，常常会出现因为一些未知原因导致表达量低甚至表达失败的情况。因为表达温度不适、PH值变化、内毒素产生等等情况，都有可能造成蛋白表达失败的情况。其中，温度、PH值等原因都可以通过外部调控来解决，但是，内毒素的去除相对麻烦。有鉴于此，普健生物今天在这里和大家具体聊聊有关内毒素去除的有效方法。

　　什么是内毒素?

　　所谓的内毒素(Endotoxin)是一种由革兰氏阴性细菌细胞膜组成的脂多糖，主要包含脂类A、菌体特异性多糖、非特异性核心多糖。因为所生成的这类物质对宿主而言是有毒的，所以，被称为内毒素。

　　内毒素会对生物造成什么影响?

　　内毒素会强烈地影响到DNA转染，而且随着内毒素的增加，会导致转染率急剧降低。而且内毒素还会激活机体非免疫性应答，进一步干扰到巨噬细胞和B细胞等免疫细胞;

　　如何测定内毒素?

　　检测内毒素的方法有很多，目前主要使用的方法主要有如下四种：凝胶法、生物学标记探测法、酶联免疫测定法、生物感染期检测法。这四种方法各具优势和不足，我们需要结合实际情况来进行选择;

　　如何去除内毒素?

　　1、超滤法。内毒素分子质量在10KDa以上，只要选择合适的过滤孔径就能将其去除;

　　2、萃取法。通过想含内毒素的溶液加入表面活性剂，使得其合成胶束，通过离心或提高温度等方式使其沉淀;

　　3、离子交换层析法。我们知道，内毒素在PH4-8范围内都带负电荷，因为其成本低、吸附量大，广发用于内毒素去除;

　　4、疏水层析法。内毒素比一般蛋白具备更强的疏水性，我们可以用这个方法来实现;

　　5、凝胶过滤层析。通过加入硫酸铵等盐分子，使得其聚集成超大分子，而后通过凝胶过滤层析法来实现分离;

　　在蛋白表达过程中，内毒素的去除是非常重要的，否则很容易造成蛋白表达量不够甚至表达失败的情况。所以，当蛋白表达量低时，我们可以选择合适的方法来实现。武汉普健生物专业为广大用户提供蛋白表达服务，如果您有相关需求，欢迎来电咨询。