普健生物 http://kx.atagenix.cn/ 2022-06-07
分子互作全称是“分子间相互作用”,可以说是生命活动的基础。提到分子互作,不可避免地会提到其中心法则中的三大主题:DNA、RNA和蛋白质。所以,目前分子互作主要分为三大类:核酸与核酸互作、核酸与蛋白互作、蛋白与蛋白互作。
常见的分子间相互作用
1、核酸与核酸互作
miRNA与mRNA结合调节体内基因的表达,从而影响蛋白的表达、修饰、酶活性等生命活动的进行。lncRNA作为体内的ceRNA与miRNA结合起到调节基因表达的作用。研究lncRNA与miRNA的相互作用对于研究生命具有重要的意义。
2、核酸-蛋白互作
相比核酸与核酸互作,核酸与蛋白互作更为常见。基因的复制、转录、翻译、修饰等过程都离不开核酸和蛋白的互作。常用的研究方法:RNA pull down+质谱(MS)、染色质免疫共沉淀(chip)、凝胶迁移或电泳迁移率检测(EMSA)、酵母单杂交(Yeast one-hybrid)、DNA pull down等。
3、蛋白-蛋白互作
蛋白分子间相互作用是蛋白分子组建复合体、执行功能的一个重要途径。免疫共沉淀实验结果具有更接近真实生理条件下蛋白相互作用信息的优点,配合GST pull down,可以研究蛋白之间是直接相互作用还是间接相互作用,而酵母双杂对于研究低表达的蛋白、瞬时表达蛋白具有更高灵敏度的优点。
上述传统用于鉴定生物大分子间相互作用的技术,具体实验中常因目的蛋白表达量低、抗体灵敏度低等原因而检测不出目的条带,或者因为抗体的特异性不好,而无法判断抗体是否与目的蛋白有结合,同时也极易出现假阳性或者假阴性的结果。
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