细胞转染的定义及其具体步骤

　　细胞转染是将外源分子如DNA，RNA导入真核细胞的技术。它已成为一种研究基因表达调控，基因突变分析，蛋白质生产的常规方法，其应用范围越来越广。

　　细胞转染可分为瞬时转染和稳定转染两大类

　　瞬时转染

　　外源基因进入受体细胞后，存在于游离载体上，不整合在细胞的染色体上。此时，外源DNA仍然以附加的形式存在于细胞内，因此，mRNA或蛋白质产物必须在短时间(1-3天)内进行测定或分析，而且质粒的人工构想和拷贝数可能会导致特异性调控元件失活或具有特异功能。其优点是快捷、简单，易于对结果进行分析，因此成为启动子功能分析的首选方法。

　　稳定转染

　　外源DNA整合到宿主细胞的染色体上。由于外源基因被整合到细胞的染色体中，使得调控区能更精确的模拟正常功能，对随后的转录分析没有时间限制。缺点是需要进行药物筛选和细胞扩增，因此操作难度大，需要的周期较长。

　　细胞转染的具体步骤

　　【转染前准备】转染前一天，取生长状况良好的细胞，经胰酶消化成单个细胞后，计数。根据实验需要，铺合适细胞量在板中，使第二天转染时的细胞密度达到80-90%。

　　在做转染实验前一般给细胞更换新鲜的完全培养基，并置于培养箱中继续培养。

　　准备几个无菌的1.5ml EP管，并做好标记。一支EP管上标记DNA(即质粒的名字)，一支EP管上标记lipofectamine 2000。

　　分别在两支EP管加入50微升的opti-MEM。

　　在标记质粒的EP管里加入质粒，另一支EP管里加入脂质体。

　　分别轻轻混匀，室温静置5 min。

　　将含有质粒的opti-MEM培养基加入到含有脂质体的opti-MEM的培养基中。

　　轻柔颠倒混匀，室温静置20 min。

　　将此质粒脂质体复合物直接加入24孔板中，轻轻推匀，置于培养箱中继续培养24 h-48 h。