什么是流式抗体？它是如何生产的？

　　流式抗体和流式细胞术一样，以流式细胞仪为检测手段，就能够同时检测单个微粒(单细胞悬液、生物颗粒等)的多项特性或对特定群体加以分选，快速、准确、客观。

　　也无法同

　　流式细胞仪

　　保持一致：能以流式细胞术为理论基础，集流体力学、激光技术、电子工程学、分子免疫学、细胞荧光化学和计算机为一体，可对高速直线流动的细胞或生物微粒进行快速定量测定和分析，

　　而且在生物学中的应用也非常广泛，可以对细胞凋亡、细胞增殖、细胞内钙离子浓度、细胞膜电位，细胞表面分子、细胞核酸、细胞内活性氧水平、细胞内或细胞核内抗原等进行检测与分析!

　　拥有完善可靠的工作原理

　　不过话说回来，即使我们做不到像流式细胞仪一样快速高效准确，也可以学一学流式细胞术的操作流程，毕竟它看起来也只有三步而已(没钱买猪肉，总可以流一下口水吧)。

　　常规的操作流程

　　01、样品制备

　　培养的贴壁细胞

　　需用0.25%胰蛋白酶(不含EDTA)消化、PBS洗涤、固定液重悬或者低温保存待用。

　　新鲜组织

　　需消化成单细胞悬液(酶处理法、机械法)：消化、生理盐水洗涤、滤网过滤、固定液重悬或者低温保存待用。

　　石蜡包埋组织

　　先将蜡块切成10-50 um厚的组织片、研磨、脱蜡、水化，再消化、生理盐水洗涤、滤网过滤、固定液重悬或者低温保存待用。

　　02、荧光抗体标记

　　直接染色

　　细胞直接结合标记好荧光染料的抗体。它的优点是操作简单，降低二抗的非特性结合背景。

　　间接染色

　　细胞与不是荧光标记的一抗结合再与带荧光标记的二抗结合来检测。

　　03、流式细胞仪上机检测及数据分析

　　如果听了很多道理，

　　仍然过不好自己的一生，

　　可能是因为那些道理不够真。

　　求经验，也要看对象。

　　AtaGenix就会给你真真的流式细胞术经验之

常见问题

　　解决方案

　　如何选择合适的荧光抗体?

　　荧光标记流式抗体的方式包括直接标记和间接标记两种。间接标记二抗会增加实验步骤、清洗多次造成细胞浪费，会影响实验的准确性，所以在流式实验过程中，尽量选用直接标记的抗体进行实验，尽量减少实验工序和过程，保证实验的真实性和准确性。

　　实验过程中是否需要设置同型对照?

　　同型对照是使用与一抗相同种属来源、相同亚型、相同剂量和相同的免疫球蛋白及亚型的免疫球蛋白，用于消除由于抗体非特异性与细胞结合而产生的背景染色。同型对照是真正意义上的阴性对照，对流式细胞术不是非常熟悉的人员，根据同型对照可以判断阳性细胞的位置;一些特异性不高的抗体(如多抗)，非特异性结合非常多，使用同型对照可排除假阳性，因此同型对照的设置是需要的。

　　利用流式软件分析数据时如何设门(gating)?

　　流式软件数据分析的目的是来确定所分析样本中表达标记物的目的细胞群的阳性率，因此在做流式数据分析时，首先要做的就是要准确地圈出目的细胞群。常见的设门方法有阈值设门和散射光设门等。

　　(1)FSC和SSC联合设门

　　FSC，即前向散射，也称小角散射，值大小与细胞直径成近似直线关系。SSC，即侧向散射，又称90°散射，它对细胞膜、胞质和核膜的折射更为敏感，其散射强度几乎与细胞内颗粒结构的多少近似成正直线关系。由于前向散射光与细胞的大小有关，侧向散射依赖于粒子/细胞的密度(比如胞浆颗粒数量，细胞膜尺寸)，根据细胞不同的大小和密度的差异而将细胞群区分开来。FSC和SSC联合设门最大的优点就是可以排除碎片和噪声的干扰。

　　(2)荧光参数与散射参数(FSC/SSC)组合设门

　　将细胞的荧光参数与物理性状相结合设门，特别适合检测低表达分子的流式实验。

　　(3)反向设门

　　根据被标记细胞的荧光特点，截取某一特定荧光参数的细胞群，在FSC/SSC散点图中找到该群细胞进一步分析。反向射门一般多用于在细胞群中分布相互重叠或者不易确定的细胞群。