盘点那些常见的重组蛋白融合标签的酶切方法

　　蛋白质重组表达通常会融合蛋白或多肽标签以便于重组蛋白的表达，示踪和纯化等，常见标签有His*6，GST，Strep，Fc，MBP，Flag和组合式双标签或多标签。

　　对于GST，MBP，Fc等蛋白标签来说，因为其分子量较大，所以，我们一般会对其进行酶切去除，以消除其对目标蛋白的结构与功能的影响;而多肽标签分子量较小，所以免疫原性相对较低，基本上不会对蛋白质的结构和功能造成影响，一般不用酶切去除，当然了，对于那些用于结构生物学或其他较高级研究的蛋白来说，我们通常也会将小分子量多肽标签酶切去除，以保证其能够达到最佳效果。

　　去除标签的关键则在于选择的蛋白酶是否合适，并构建出相应的氨基酸识别序列。。

　　普健生物为您盘点现下最为常用的几种蛋白酶及对应的酶切位点，下面我们对五种常见的蛋白内切酶做个简单介绍。

　　01、SUMO protease: 也叫Ulp，是重组表达的酿酒酵母ULP1(Ubl-specific protease 1)片段，它可以依靠特异性去识别SUMO融合蛋白的空间结构。SUMO protease因为其特异性好，活性高，酶切条件温和，缓冲液耐受好等特点，所以，其可以直接通过各种缓冲液体系中高效切除SUMO融合蛋白。而且由于SUMO标签具备极佳的促溶和促表达交效果，使得SUMO标签和SUMO protease称为重组蛋白表达中最常见融合蛋白标签与蛋白内切酶的组合。

　　02、HRV 3C Protease：重组表达的人源3C Protease，是一种半胱氨酸蛋白酶，可以特异识别氨基酸序列Leu-Glu-Val-Leu-Phe-Gln Gly-Pro，而且能够在谷氨酰胺(Gln)和甘氨酸(Gly)之间切开。

　　03、Enterokinase：肠激酶是一种丝氨酸蛋白水解酶，可以高效且专一地识别出蛋白质中的Asp-Asp-Asp-Asp-Lys↓(DDDDK↓)序列，并在赖氨酸(Lys, K)的C端水解肽键。

　　04、TEV protease：是一种重组表达的半胱氨酸蛋白酶，能特异性地识别七肽序列Glu-Asn-Leu-Tyr-Phe-Gln↓Gly/Ser，并在Gln和Gly/Ser氨基酸残基之间进行酶切。TEV Protease的最佳酶切温度是30℃，在4℃时也保留了一定的活性，为尽可能保留目标蛋白活性，在实际操作中常用4℃过夜酶切。

　　05、Thrombin：凝血酶来源于牛血浆，分子量37 kD，是由两条肽链(31 kD和6 kD)通过二硫键组成的。37℃时, 凝血酶活性很高，温度降低活性也随之降低，在4℃时基本无酶切活性，所以实验室使用凝血酶切割目标蛋白时常采用室温酶切或37℃水浴酶切。但热不稳定蛋白在室温或37℃水浴酶切过程中很有可能会发生失活或者沉淀，且凝血酶为牛血浆分离提取，纯度低，需要用苯甲脒琼脂糖才能将酶从蛋白样品中去除，故并不推荐使用。普健生物积累了丰富的经验来解决凝血酶酶切过程中目标蛋白受热沉淀的难题，欢迎大家留言咨询。