什么时候需要构建稳定细胞株及其构建方法和要点

　　在各类细胞实验中，我们常常需要用到稳定细胞株构建来辅助各类实验，但是因为质粒构建时间长、成功率低，所以，很多时候我们都不会选择构建稳定细胞株。只是，对于一些需要长期研究的项目来说，需要通过构建稳定细胞株来实现。

　　那么，什么时候才需要构建稳定细胞株呢?

　　1、长期研究需求

　　对于一些细胞来说，需要对其进行长期研究，因为细胞的分裂次数有限，所以需要通过构建稳定细胞株来实现;

　　2、会干扰目的蛋白表达的情况

　　对于一些蛋白来说，其半衰期非常的长，需要如果采用瞬时RNA也只能干扰表达，无法实现持续性表达。这个时候，就可以通过构建稳定细胞株来实现;

　　3、目的蛋白表达不稳定的情况

　　采用瞬时转染会引入极大的表达数，会因为一些人为原因造成实验结果的不精确，这个时候就需要通过构建稳定细胞株来进行实验研究;

　　4、需要使用到诱导表达的情况

　　对于那些需要诱导表达的蛋白，采用稳定细胞株能够实现;

　　稳定细胞株的构建方法有哪些?

　　稳定细胞株构建主要采用两种方法：利用单克隆方法筛选稳定细胞系和病毒感染筛选稳定细胞株;

　　1、转染质粒后，采用单克隆方法筛选稳定细胞株

　　这个方法相对简单，就是利用质粒感染的方式将目的基因转染到细胞中去。而后再通过过表达的方式挑选出合适的细胞，并将其培养成细胞株。但是，对于质粒感染来说，游离于细胞质中的质粒很容易降解，转染整合几率极低，需要跳去单克隆株来构建。

　　2、利用病毒感染筛选稳定细胞株

　　病毒感染法相比质粒转染的效率要更高一些，是目前主流的细胞株筛选方法。通过慢病毒制备稳定细胞株的方式，这个方式整个效率更高、转录效率高、表达效果高等;

　　稳定细胞株构建的注意要点有哪些?

　　对于稳定细胞株构建来说，其为一个长期过程，无论是质粒构建到慢病毒包装、细胞感染、细胞筛选等每个过程都是至关重要的。任何一个过程错误，都可能造成半年的时间付诸流水。所以，尽可能在每个过程都做到尽善尽美;

　　稳定细胞株的构建是一个长期且严谨的过程，需要严格按照实验室操作规范仔细操作，当然了，如果有需要，可以适当地对过程进行修改和优化，以便于进一步提升构建效率。当然了，对于一般的蛋白制备需求来说，稳定细胞株的构建相对来说要困难一些，需要有专业的技术团队。武汉普健生物专业为广大用户提供稳定细胞株构建服务，如果您有相关需求，欢迎来电咨询。