免疫沉淀技术可以与基因组技术、放射同位素技术、聚合酶链式反应、免疫印迹等实验方法相结合，对较复杂的蛋白质与DNA/RNA的关系和定位提供非常好的解决方法。先了解这几种方
免疫沉淀技术可以与基因组技术、放射同位素技术、聚合酶链式反应、免疫印迹等实验方法相结合，对较复杂的蛋白质与DNA/RNA的关系和定位提供非常好的解决方法。先了解这几种方法的区别：
| 种类 |
研究对象 |
结合技术 |
|
染色质免疫沉淀
(CHIP) |
DNA-蛋白质 |
PCR |
|
蛋白质免疫沉淀
(PIP) |
抗原-抗体 |
蛋白免疫印迹 |
|
放射免疫沉淀
(RIP) |
抗原-抗体 |
放射性同位素技术 |
当然，再结合其他技术还可以衍生出更多的技术，本篇先来剖析一下染色质免疫沉淀（CHIP）。
CHIP
染色质免疫沉淀 (ChIP) 是研究体内DNA与蛋白质相互作用的方法。其原理是在活细胞状态下固定蛋白质-DNA复合物，并将其随机切断为一定长度范围内的染色质小片段，然后通过免疫学方法沉淀此复合体，特异性地富集目的蛋白结合的DNA片段。后期通过对目的片断的纯化与检测，从而获得蛋白质与DNA相互作用的信息。
应用：ChIP可以用来检测体内反式作用因子与DNA的动态作用，还可以用来研究组蛋白的各种共价修饰与基因表达的关系。而且，ChIP与其他方法的结合扩大了其应用范围：ChIP与基因芯片相结合建立的ChIP-on-chip方法已广泛用于特定反式因子靶基因的高通量筛选；ChIP与体内足迹法相结合，用于寻找反式因子的体内结合位点；RNA-ChIP用于研究RNA在基因表达调控中的作用。
加入目的蛋白的抗体，与靶蛋白-DNA复合物相互结合
加入ProteinA，结合抗体-靶蛋白-DNA复合物，沉淀
告诉你，还有更简单粗暴的！
普健就有专业的CHIP检测服务，
直接来找我！
勤勤恳恳，辛辛苦苦操作了老半天
翘首以待实验成果
然后有人欢喜有人忧
怎么把“惊吓”变成“惊喜”
this is a question
只要找到破解方法，
所有的问题都不是问题！
今天我们就来一一击破
免疫沉淀系列实验中那些揪心的问题。
| 原因 |
方案 |
| 洗涤不充分 |
离心前盖上管盖反复颠倒几次 |
| 抗体浓度太高 |
检查推荐抗体用量，尝试使用更少的抗体 |
| 抗体特异性不够 |
使用亲和纯化的抗体，最好预先吸收 |
| 封闭不充分 |
优化封闭时间/温度，室温封闭1小时或4℃封闭过夜 |
| 封闭液中与其他蛋白发生抗体的交叉反应 |
换一种不同的封闭液；不要用含抗生素蛋白的牛奶封闭，牛奶含生物素 |
| 操作设备被污染 |
保证电泳仪器、印迹仪器和孵育用容器清洁，无外源污染物 |
| 原因 |
方案 |
| 蛋白未转到膜上 |
可以用丽春红染膜并结合染胶（考马斯亮蓝）后确定条带是否转至膜上或转移过头；适当调整转膜的时间和电流 |
| 一抗、二抗等不匹配 |
选择针对一抗来源的种属抗体 |
| 过度封闭 |
使用含0.5%脱脂奶粉或无脱脂奶的抗体稀释液；试用不同的封闭液；减少封闭时间 |
| 洗膜过度 |
洗膜时间不宜过长，加入的去垢剂不宜过强或过多，建议使用0.05%的弱去垢剂Tween-20 |
| 曝光时间太短 |
延长胶片的曝光时间，超感应化学发光底物会持续发光至少6个小时 |
| 原因 |
方案 |
| 细胞传代次数过多，蛋白表达模式分化 |
使用原始或传代少的细胞株或进行平行实验 |
| 样本处理过程中目的蛋白发生降解 |
使用新鲜制备的标本并使用蛋白酶抑制剂；样本处理时在冰上操作 |
| 一抗不纯 |
使用单克隆或亲和纯化的抗体，减少非特异条带 |
| 一抗特异性不高 |
重新选择或制备高特异性的抗体 |
如果你的WB实验出现了这些问题，
这些方案供你参考，
我们还有更详细的WB实验专场
问题多，方法更多。
小编更希望你们实验开挂，这些问题统统木有！
027-87433958
