利用兔单B细胞技术快速鉴定具有高亲和力和多种表位的抗特异型单克隆抗体

用于疾病的单克隆抗体是一类快速发展的药物，具有亲和力强、特异性强、半衰期长和药理学效力强的特点。这些特性使抗体成为开发针对多种人类疾病的有效治疗方法的成熟平台。它们的应用领域不仅限于标准的免疫球蛋白G (IgG)格式，还可以扩展到抗体片段(scFv, VHH)、药物偶联物和双特异性等新型格式的"不可药物化"靶点。随着众多抗体治疗药物(Ab1)不断进入临床前开发和临床试验，这些项目对高质量的关键生物分析试剂的需求很高。在这种情况下，抗独特型抗体(（Anti-idiotype antibody, Anti-ID Abs)已成为临床前和临床阶段生物分析应用的优选方案之一。常用的制备方法包括体内杂交瘤技术、体外噬菌体展示免疫抗体库或合成抗体库。

兔单抗以其高亲和力和多样性而闻名，使其成为治疗候选生物分析程序中高度专业化研究试剂的潜在有用来源。过去兔单克隆抗体的产生采用杂交瘤技术;然而，目前的发现是由更强大的单个B细胞培养和克隆方法驱动的。

高质量的抗独特型抗体(Anti-ID Abs, Ab2)，特别是CDR特异性的Ab2，对开发敏感、特异和稳健的PK检测和抗药物抗体(ADA)检测至关重要，以支持药物开发项目的临床前和临床研究。研究人员使用基于兔单个B细胞技术的方法来扩大了常规制备大样本抗独特型抗体的能力，并且取得了很高的成功。

基于单个B细胞技术的Xten™ Mab Single B兔单克隆抗体开发有三个主要流程，鉴定和分离单个B细胞；扩增和克隆抗体基因；表达、筛选和鉴定抗原特异性抗体。 Xten™ Mab Single B兔单克隆抗体开发以单个B细胞为起始点，利用每个B细胞只产生一种特异性抗体的特性，直接从免疫的兔子中通过随机分离和抗原特异性分离两种方式从外周血或淋巴组织中分离单B细胞，从单个B细胞中扩增出抗体基因，进而获得抗原特异性抗体。该技术所制备的抗体具有高通量、高效率、高稳定性、高特异性等优点，保留了丰富的基因多样性和轻重链可变区的天然配对，应用前景广泛，是最高效的抗体筛选方法之一。特别是在快速应对病原微生物传染病的抗体开发上有着巨大优势。
在这项研究中，研究人员建立了一种富集IgG+ B细胞的方法，并从外周血单个核细胞(PBMC)中鉴定出抗原特异性IgG+ B细胞。通过基于磁珠的负向选择策略有效地清除PBMCs中的非IgGB细胞，包括IgM B细胞，髓系细胞和T细胞。这种技术不仅显著提高了IgG+ B细胞的数量，而且还缩短了分选时间，从而有可能提高B细胞的存活率，这有助于提高PCR及后续分子克隆的成功率。 在临床前开发和临床试验期间，抗独特型抗体是PK和ADA检测所需的宝贵试剂，用于治疗药物的生物分析支持。高灵敏度、高特异性、高亲和力以及表位结合特异性是该类抗体试剂的重要特点。基于兔单克隆B细胞技术发现的单克隆抗体使研究人员能够在满足严格的生物分析性能要求的同时，在多种单克隆抗体项目中持续、高效和高产地制备出具有所需特性的单克隆抗独特型抗体组合，为单抗治疗开发项目的生物分析支持提供了有价值的关键试剂。

参考文献
WeiYu Lin,Rapid identification of anti-idiotypic mAbs with high affinity and diverse epitopes by rabbit single B-cell sorting-culture and cloning technology,PLoS One, December 21, 2020.