什么是原核蛋白表达？它的影响因素有哪些？

　　原核蛋白表达是目前最常用的重组蛋白表达方式之一，其操作相比其他蛋白表达方式来说要相对简便，要求也更低，相对与哺乳动物表达系统来说，也更加的经济节约。当然了，原核蛋白表达也有些不足的地方，比如蛋白表达量相对较低，甚至出现蛋白不表达的情况，又或者表达的蛋白不在上层，容易形成包涵体等状况。下面，普健生物就和大家具体介绍一些会影响到原核蛋白表达的因素及其解决办法。

　　首先，我们和大家聊聊，具体哪些因素会影响到原核蛋白表达。
　　1、翻译起始位点

　　现阶段的大部分的表达载体都会提供起始位点，可以说，它已经把起始密码子与核糖体结合位点的距离进行了优化，通常不需要我再去进行添加，但是，我们还是要注意载体图谱上是否注明有起始密码子和终止密码子。

　　2、GC含量

　　当表达序列中的GC含量超过70%的时，就有极大的可能会造成蛋白在大肠杆菌中的表达水平低的现象，这个我们一定要注意。

　　3、mRNA二级结构

　　在起始密码子附近的mRNA二级结构可能会抑制翻译的起始或者造成翻译暂停从而产生不完全的蛋白。

　　4、密码子的偏爱性

　　如果外源基因密码子的使用频率和宿主菌高效表达的基因密码子的使用频率相差较大时，翻译时核糖体在稀有密码子处就会产生停顿，这个情况不仅会降低蛋白质的合成效率，甚至可能会造成新生肽链的错误折叠，从而影响到其延伸，更有甚者会造成停止翻译。

　　5、质粒载体的选择

　　在进行质粒载体的构建时，我们通常需要考虑到质粒上的元件，包括启动子，多克隆位点，终止密码子，融合标签，复制子，筛选标记基因等因素。

　　6、基因或者蛋白的大小

　　我们需要知道，小于10 kd和大于100 kd的蛋白，都是相对难以表达的，我们在选择的时候，需要尽量避免掉这些问题。

　　7、外源基因对宿主有毒性

　　有一些外源基因会抑制宿主菌的生长，更有甚者可能会导致宿主的死亡，表观现象：宿主菌在诱导后菌体量上升缓慢或不再生长。

　　8、基因突变

　　碱基的突变、插入或缺失对阅读框的影响，有可能会导致蛋白结构发生变化，或者会造成蛋白的合成提前结束。

　　9、培养诱导条件

　　培养基的成分，或者环境条件(比如温度、诱导时机、诱导剂，浓度、诱导时间等)也都会影响到蛋白表达。